服务简介
大肠杆菌表达系统是将目的基因引入表达载体后转入大肠杆菌(Escherichia coli)中进行扩大培养，纯化表达大量蛋白。此方法是分子生物学中常用的外源蛋白表达之一。近年来，大肠杆菌表达系统得到了完善与发展。
大肠杆菌蛋白共表达（Co-expression）是指在同一宿主细胞内同时表达两个或多个外源基因，以研究它们之间的相互作用、辅助目标蛋白的正确折叠与功能、提高表达效率或构建多组分复合物等。
一、蛋白共表达的目的
1.辅助蛋白折叠：某些目标蛋白可能难以正确折叠，通过共表达分子伴侣（如GroEL/ES、DnaK/J/GrpE等）可以促进其形成正确构象。
2.提高可溶性：难溶或不溶性蛋白（包涵体）可通过与特定辅助因子共表达提高其可溶性。
3.构建功能复合物：当研究的蛋白需要与其他亚基形成复合体时，共表达可以确保各组分按比例合成，便于复合物的形成与研究。
4.酶反应系统构建：在代谢工程中，多个酶需要协同作用，共表达可以维持它们在细胞内的相对比例。
5.标签辅助纯化或检测：一个基因带标签（如His-tag），另一个不带，共表达有助于目标蛋白的检测或纯化。
服务内容
常用的共表达策略
1. 双质粒共表达系统
原理：将两个待表达的基因分别克隆到两个不同的质粒上，然后共同转化到大肠杆菌中。
优点：灵活，可以独立调控各个基因的表达。
缺点：质粒不稳定，可能发生质粒丢失；需要筛选双抗性（或多抗性）菌株；表达水平可能不均衡。
2. 单质粒多顺反子表达系统
原理：将多个基因插入到同一个质粒中，利用一个启动子驱动多个基因串联表达，通常使用内部核糖体进入位点（IRES-like 元件）或直接串联，通过不同 ribosome binding site (RBS) 强度控制表达比例。
优点：遗传稳定性高，不需要双抗筛选。
缺点：表达比例调控较复杂，需要优化RBS或启动子强度。
3. 使用不同启动子或诱导条件
通过使用不同诱导条件（如 IPTG 诱导 vs 温度诱导）或不同强度的启动子，控制两个基因的表达时机或水平，实现更精细的调控。
服务流程
共表达实验流程
1.基因克隆
将目标基因和共表达基因（如伴侣蛋白、互作蛋白）分别或一起克隆入合适的共表达载体中。
2.质粒转化
将构建好的一个或两个（或多）质粒共同转化到合适的大肠杆菌表达菌株中（常用 BL21(DE3)、Rosetta、Origami 等）。若使用双质粒系统，需确保菌株具备相应的抗性并能够稳定携带多个质粒。
3.诱导表达
通常使用 IPTG 诱导 T7 启动子表达，也可根据所用启动子类型选择适当诱导方式。
有时需要优化诱导时机（如对数中期）、温度（如 16°C 有助于可溶性表达）和诱导剂浓度。
4.样本收集与分析
收集菌体，进行 SDS-PAGE、Western blot 或其它分析手段，检测各个蛋白的表达情况与相对比例。可进一步做可溶性分析（裂解后离心看上清与沉淀分布）、共纯化（如通过 His-tag 拉下复合体）或功能验证。
应用领域
1.酶复合体的共表达：如在大肠杆菌中同时表达多个代谢通路酶，用于体外重建代谢途径。
2.蛋白-蛋白相互作用研究：共表达疑似相互作用的两个蛋白，通过 Co-IP 或 Pull-down 验证结合。
3.信号通路组件表达：如受体与配体、激酶与底物等。
4.结构生物学研究：共表达多亚基蛋白复合物，用于结晶或冷冻电镜分析。
服务优势
支持多顺反子表达与双质粒共表达系统，根据客户需求灵活定制表达策略，优化表达比例与产量。
根据客户的研究目的（如辅助折叠、提高可溶性、构建功能复合体、研究蛋白互作等），定制共表达实验方案。
可提供带标签的目标蛋白+无标签辅助因子（如互作蛋白）的共表达，满足客户后续实验需求。
SDS-PAGE、Western Blot等多重检测，确保目标蛋白的表达成功与质量可控。
提供全流程实验报告，包括载体构建信息、菌株信息、诱导条件、表达分析结果等。
如果您有特定的蛋白共表达需求（比如哪两个蛋白、是否可溶、是否需要互作研究等），百欧泰可以为您提供更具体的构建建议、载体选择、诱导条件优化等方案。
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