蛋白表达服务-北京百欧泰生物科技有限公司

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酵母蛋白表达服务

服务简介

随着基因工程技术的迅速发展,已有数百种外源蛋白利用巴斯德毕赤酵母表达系统获得了成功表达表达系统的优点、系统的构成,外源基因转化该表达系统的方式及表达特点。

酵母表达系统是由甲醇营养型酵母菌编码基因AOX1与AOX2诱导和调控，含AOX1启动子的质粒非常利于外源基因的表达调控。在甲醇诱导下实现外源基因的高效表达.外源基因整合入酵母的染色体基因组后，通过营养缺陷型基因或抗性基因进行阳性转化子的筛选.将外源基因阅读框架与信号肽相融合即可得到被修饰的分泌型外源目的蛋白。酵母表达系统兼有原核和高等真核系统的优点，蛋白翻译后能进行正确加工、修饰，合理的空间折叠，使得蛋白的可溶性得到提高，是较优的重组真核蛋白生产制备工具。

酵母表达系统是基因工程研究中广泛使用的外源蛋白表达系统。但外源基因在该系统中表达时,由于受自身特性及环境等诸多因素的影响，在表达过程中出现表达量不够稳定或较低，甚至不表达的情况，百欧泰借助丰富的蛋白表达经验，不断完善改进内部体系，为客户提供高效的蛋白产量。

服务步骤

1 基因合成及密码子优化（可选）

根据选用的表达系统对cDNA进行密码子及mRNA二级结构的优化

2 载体构建

表达载体筛选

根据客户需求，对蛋白基因进行序列分析选择优化载体（无糖基化蛋白适于胞内蛋白表达载体；糖基化或分泌蛋白适于分泌蛋白表达载体）

克隆至表达载体

测序验证构建质粒准确性

亚克隆质粒

周期：2-3周

3 载体线性化及转化

选择合适的内切酶对重组质粒进行线性化（提高转化效率与表达稳定性）

电转法转入合适的酵母感受态细胞

将培养好的酵母菌株，低温条件下加入山梨醇与线性化载体电转；涂有zeocin培养基上初步筛选转化后的酵母体系

PCR鉴定筛选高拷贝表达菌株

挑取多个单菌落，进行菌落PCR，筛选验证高拷贝菌株，并进行扩大培养

筛选阳性克隆，进行小试

周期：1-2周

4 表达及纯化

优化单克隆菌株培养条件

收集克隆菌株细胞破碎上清液

亲和、离子交换、疏水多种层析方法纯化

SDS-PAGE/WB表达效果分析

周期：1-2周

5 大量表达及纯化（可选）

周期：2-3周

6 蛋白后期加工（可选）

标签切除、去除内毒素、除菌、冻干、N端测序等

按照小试工艺放大生产规模，制备客户需要的合格蛋白产品

7 交付结果（可商榷）

测序报告

纯化蛋白

SDS-PAGE/WB报告

COA

服务优势

酵母表达体系遗传和生理背景清楚且安全，结合了原核与高等真核表达系统的优点：

l 生长快成本低：易大规模高密度发酵培养，适合重组蛋白工业放大化生产；

l 应用广泛：既可在细胞外表达，又可在细胞内表达；

l 蛋白修饰：如去磷酸化、糖基化等，适于制备功能性蛋白；

l 更高的稳定性：外源基因可以单拷贝或多拷贝的形式整合到酵母染色体上伴随复制。

百欧泰生物酵母蛋白表达体系具有丰富的宿主细胞和载体选择经验，可提供多种服务优势：

l 体系成熟：具备完善的酵母表达平台，成熟的蛋白表达体系；

l 服务为主：可根据蛋白特性与客户需求综合分析，设计不同的实验方案，并对客户整体表达体系进行摸索与优化。

l 自我完善：时刻完善蛋白诱导表达的操作步骤，为客户提供高质量蛋白产品。

服务流程

双方沟通一致后确定实验方案，确定服务要求-签订合同—预付款-开始实验-成果交付

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