服务简介
昆虫细胞共表达常用的平台是杆状病毒-昆虫细胞表达系统（Baculovirus Expression Vector System, BEVS），其原理是通过基因工程改造杆状病毒，将外源基因插入病毒基因组，感染鳞翅目昆虫细胞（如Sf9、Sf21、High Five?）后，利用昆虫细胞的翻译机器表达目标蛋白。
昆虫细胞蛋白质共表达是利用昆虫细胞（如杆状病毒表达系统）同时表达多个外源蛋白质的技术，广泛应用于结构生物学、功能研究、疫苗开发及工业酶生产等领域。
一、系统优势
1. 支持真核翻译后修饰（如N-糖基化、磷酸化、二硫键形成），适合复杂蛋白（如膜蛋白、病毒样颗粒）的正确折叠；
2. 蛋白表达量相对于HEK293细胞较高。
3. 宿主细胞背景干净，无内源性蛋白酶过度降解风险。
服务内容
在BEVS中实现多蛋白共表达，需通过载体设计和转录调控优化，常见策略包括：
1. 单启动子多顺反子策略
利用同一强启动子驱动多个基因串联表达，形成多顺反子mRNA。多个基因通过2A肽或IRES（内部核糖体进入位点）分隔。
2. 多启动子独立转录策略
将不同基因分别克隆到含独立启动子的载体中，共转染昆虫细胞。病毒共感染时，不同启动子驱动各自基因转录，实现独立表达。此策略灵活性高，但需注意启动子强度平衡，避免某一蛋白过表达影响细胞活性。
3. 共转染双/多杆粒（Bacmid）
通过共转染携带不同目标基因的重组杆粒（如Bac-to-Bac系统生成的杆粒），利用杆状病毒的共感染特性，在同一细胞内表达多个蛋白。此方法适合大规模生产，但需优化病毒滴度和感染同步性。
服务流程
共表达实验流程
1. 目标蛋白选择与策略确定
将目标基因插入杆状病毒转移载体（如pFastBac系列），引入分子标签（如His-tag、HA-tag）便于后续检测纯化。
2. 重组杆粒制备与病毒扩增
2.1转座与重组杆粒生成（Bac-to-Bac系统为例）
将重组转移载体转化至含杆状病毒骨架质粒（Bacmid）和转座酶的DH10Bac感受态细胞，通过转座作用将目标基因插入杆粒基因组，生成重组杆粒（Recombinant Bacmid）。提取重组杆粒DNA，测序验证插入基因完整性。
2.2初始病毒扩增（P1病毒）
用脂质体（如Cellfectin II）将重组杆粒转染昆虫细胞（如Sf9细胞），转染后5-7天收集上清，获得低滴度的P1病毒（用于后续扩增）。
2.3病毒滴度测定与扩增（P2/P3病毒）
用TCID50法或qPCR测定P1病毒滴度，按合适MOI（感染复数，通常0.1-1）感染对数期Sf9细胞，扩大培养至病毒滴度达标（P2/P3病毒，滴度>107 PFU/mL），分装保存于-80℃。
3. 细胞准备
培养对数期昆虫细胞（如Sf9/Sf21，密度1-2×10^6 cells/mL，悬浮培养），确保细胞状态良好（活力>95%）。
4. 共感染操作
根据载体策略选择共感染方式：
单杆粒多顺反子：用含串联基因的重组杆粒感染细胞（MOI=1-5）；多杆粒独立转录：用两种含不同目标基因的重组杆粒共感染（如MOI_A=1，MOI_B=1，总MOI=2），确保两种病毒同步感染。
5.细胞收获
达到表达时间点（如感染后72小时），离心收集细胞（1000×g，10分钟），或收集上清（若为分泌表达）；细胞沉淀用PBS洗涤后，液氮速冻或直接用于裂解纯化。
6.亲和纯化
根据标签选择填料：His-tag用Ni-NTA亲和柱，Strep-tag用Strep-Tactin柱，MAC-tag用Strep-MAB柱；洗脱条件：咪唑梯度洗脱（His-tag）或生物素竞争洗脱（Strep-tag），收集纯化组分。
7. 复合物验证与功能检测
SDS-PAGE/非变性PAGE：确认多蛋白是否形成复合物（非变性条件下共迁移）；
Western Blot：检测各亚基比例是否平衡（如VLPs中结构蛋白摩尔比是否符合天然状态）；
功能验证：如VLPs通过电镜观察形态，抗体通过ELISA检测结合活性。
应用领域
1. 病毒样颗粒（VLPs）生产：共表达病毒结构蛋白，自组装成无感染性的VLPs，用于疫苗开发。
2. 膜蛋白复合物研究：共表达膜蛋白及其辅助因子（如GPCR与G蛋白），维持天然构象以解析结构（冷冻电镜）或研究功能。
3. 酶复合体工程：如共表达纤维素酶的不同组分（内切酶、外切酶），提高降解效率；或表达代谢途径酶（如异源合成途径的多酶），提升目标产物产量。
4. 抗体工程：共表达重链（HC）和轻链（LC）抗体片段，促进可变区正确配对，生产功能性抗体。
服务优势
我们基于经典杆状病毒-昆虫细胞表达系统（BEVS），构建了高效共表达平台，针对性解决多蛋白共表达中的多种难题。
基于目标蛋白特性，免费提供共表达策略设计，降低实验风险。
整合分子克隆、病毒包装、蛋白纯化及结构表征技术，避免客户多平台切换成本。
支持从“仅共表达验证”到“毫克级/克级纯化蛋白”的梯度服务，覆盖临床前抗原制备、抗体工程、结构生物学研究等场景。
如果您有特定的蛋白共表达需求（比如哪两个蛋白、是否可溶、是否需要互作研究等），百欧泰可以为您提供更具体的构建建议、载体选择、表达条件优化等方案。
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