服务简介
哺乳动物蛋白表达是利用哺乳动物细胞（如CHO、HEK293等）异源表达外源基因，生产具有天然折叠、修饰和功能的蛋白质的技术。相较于原核（大肠杆菌）或酵母表达系统，哺乳动物细胞能更准确地模拟人体蛋白的翻译后修饰，因此在治疗性蛋白（抗体、细胞因子）生产、功能蛋白研究及疾病模型构建中至关重要。
哺乳动物细胞蛋白共表达是指在同一哺乳动物细胞中同时表达两个或多个外源蛋白的技术。该技术在基础研究（如信号通路解析、蛋白互作研究）和应用领域（如治疗性蛋白生产、病毒样颗粒组装）中具有重要价值。
一、蛋白共表达的目的
1.功能协同研究：解析多蛋白复合体的组装机制（如GPCR与信号转导分子的复合物）、代谢通路中的酶级联反应。
2.治疗性蛋白生产：如单克隆抗体（重链+轻链）、融合蛋白（抗原表位+标签）或多价疫苗抗原的共表达。
3.基因编辑工具优化：共表达Cas9核酸酶与sgRNA，或碱基编辑器。
服务内容
常用的共表达策略
哺乳动物细胞共表达依赖载体设计，核心是将多个目的基因整合到同一载体或不同载体中，通过转染/病毒感染进入细胞。主要系统包括：
1. 基于质粒的多顺反子载体
通过同一启动子驱动多个基因转录，利用转录后调控元件实现翻译分离，常用元件：(1) IRES（内部核糖体进入位点）：允许核糖体直接结合mRNA内部起始翻译（如EMCV-IRES）。(2) 2A肽（自切割肽）：短肽（约20aa）插入两个基因之间，翻译后通过自切割释放独立蛋白（如P2A、T2A、E2A）。优势：切割效率高，蛋白表达量均衡，是目前主流选择。
2. 双载体共表达
将目的基因克隆到两个独立载体（如pcDNA3.1和pEF1α），通过不同启动子（如CMV、EF1α）驱动表达。优点：灵活性高，可独立优化每个载体的表达效率；缺点：需共转染两个载体，可能因转染效率差异导致共表达比例不稳定。
服务流程
1. 目的基因选择与优化
确定共表达的靶蛋白（如抗体轻重链、信号通路组分），需明确是否添加标签（如His-Tag、Flag-Tag，用于纯化/检测）及定位信号（如分泌信号肽）。对基因进行密码子优化（针对宿主细胞，如CHO/HEK293），减少稀有密码子导致的翻译停滞。
2. 载体系统选择与构建
(1) 多顺反子载体（主流）：将目的基因串联，插入2A肽或IRES（内部核糖体进入位点，翻译效率差异较大）元件，构建成单一表达载体。
(2) 双载体共表达：将不同基因克隆至两个独立载体（如pcDNA3.1-CMV和pEF1α），需确保载体兼容性。
(3) 测序验证载体正确性（无突变、元件方向正确）。
3. 细胞系选择
瞬时表达：选转染效率高的细胞（如HEK293T、HEK293F，悬浮培养适合大规模）。稳定表达：选耐受筛选的细胞（如CHO-S、DHFR-CHO，需药物筛选单克隆）。铺板前确保细胞处于对数生长期（活力>90%），转染时细胞汇合度控制在70-80%（避免过密影响转染效率）。
4.蛋白表达验证
进行 SDS-PAGE、Western blot 或其它分析手段，检测各个蛋白的表达情况与相对比例。
应用领域
1. 哺乳动物细胞共表达是治疗性蛋白工业化生产的重要标准，尤其适用于需复杂修饰的蛋白药物：单克隆抗体（mAb）、融合蛋白与细胞因子等。
2. 共表达技术可模拟生理条件下多蛋白的协同作用，助力基础研究，如信号通路复合体组装、多结构域蛋白功能验证等。
3. 病毒学与疫苗研发：模拟病毒生命周期与抗原生产
服务优势
我们拥有多顺反子共表达技术平台，整合载体构建、细胞优化、表达调控及纯化质检全流程，支持从瞬时表达到稳定细胞系构建的灵活切换。
针对共表达常见的表达不均衡、折叠错误、糖基化异常等问题，我们提供系统性解决方案。
基础研究型：针对信号通路解析、蛋白互作研究，提供荧光标记共表达（、低背景干扰系统，助力快速获取高质量实验数据。
通过Western Blot（WB）、流式细胞术（FACS）、酶联免疫吸附试验（ELISA）多维度确认蛋白表达量及亚细胞定位。
如果您有特定的蛋白共表达需求（比如哪两个蛋白、是否可溶、是否需要互作研究等），百欧泰可以为您提供更具体的构建建议、载体选择、表达条件优化等方案。
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