服务简介
蛋白印迹法（Western blotting），又称免疫印迹法，是一种将电泳分离的蛋白质转移到固相膜载体后利用抗体进行特异性检测的分析技术。其原理基于抗原-抗体结合反应，可实现蛋白质的鉴别和半定量分析，广泛应用于蛋白质表达分析及传染病确诊等领域。
技术原理
Western Blot（WB）通过以下步骤实现目标蛋白的检测：
1.蛋白提取与定量：从细胞、组织或体液中提取总蛋白，并通过BCA/Bradford等方法定量。
2.SDS-PAGE电泳：利用聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）按分子量大小分离蛋白质。
3.转膜：将凝胶中的蛋白质转移至固相载体（如PVDF/NC膜），形成“印迹”。
4.封闭：用无关蛋白（如脱脂奶粉、BSA）封闭膜上的非特异性结合位点，减少背景干扰。
5.抗体孵育：依次加入一抗（特异性识别目标蛋白）和二抗（偶联酶或荧光基团，放大信号）。
6./显影与检测：通过化学发光（ECL）、荧光或显色反应显示目标蛋白条带，最终通过成像系统采集数据并分析。
服务内容
1.样本处理与质控
支持多种样本类型：细胞（贴壁/悬浮）、组织（动物/植物）、血清、血浆、脑脊液、分泌蛋白等。
提供样本制备指导，确保蛋白完整性。
免费进行蛋白浓度测定（BCA/Bradford法），优化上样量。
2.实验优化与执行
电泳条件优化：根据目标蛋白分子量选择凝胶浓度，调整电压/时间以减少条带拖尾。
转膜参数调整：根据蛋白大小选择湿转或半干转，优化电流/时间避免转移不完全或过转移。
抗体筛选与验证：提供常用一抗（兔/鼠源为主）及二抗（HRP/AP/荧光标记），可根据需求定制抗体组合；验证抗体特异性。
显影系统选择：默认ECL化学发光，可选荧光二抗或DAB显色。
3. 数据分析与报告
图像采集：使用专业成像仪获取高分辨率条带图。
报告内容：包含实验方法、原始图片、定量结果表、统计学分析（如组间差异显著性）及结论建议。
服务流程
需求沟通：明确目标蛋白（名称、分子量）、样本类型、检测目的（定性/定量）、特殊要求（如修饰位点）。
样本寄送：客户按要求准备样本（附清单），冷链运输（冰袋/干冰）至实验室。
实验执行：技术人员完成WB全流程，关键步骤拍照记录（如电泳胶、转膜后膜）。
数据交付：提供原始图片（TIFF格式）、定量结果（Excel）、分析报告（PDF），支持数据解读。
应用领域
基础科研：验证基因表达、研究翻译后修饰、分析蛋白亚细胞定位。
疾病研究：检测疾病相关标志物、分析病理模型（如炎症/纤维化模型）的蛋白表达异常。
药物开发：评估药物对靶蛋白的调控作用（如抑制剂/激动剂效果）、生物药（如抗体药物）的宿主细胞残留蛋白检测。
工业质检：重组蛋白表达纯化后的纯度验证、疫苗生产中病毒蛋白表达确认。
服务优势
高灵敏度：可检测低至pg级的蛋白（如细胞因子、微量修饰蛋白）。
高特异性：依赖抗体特异性，结合严谨的对照（阳性/阴性对照、内参），结果可靠。
灵活定制：支持特殊需求（如膜再生重复使用、多内参校正、跨膜蛋白检测）。
质量保障：提供实验记录溯源（电泳/转膜照片、抗体批次信息）、重复实验（关键样本双孔/双膜验证）。
注意事项
样本要求：避免反复冻融（分装保存于-80℃），组织样本需快速匀浆（加蛋白酶抑制剂），血清需去除高丰度蛋白（如IgG）。
常见问题解决：
无条带：可能因抗体失效、转膜失败、蛋白降解（检查裂解液是否含蛋白酶抑制剂）。
背景高：封闭不充分（延长封闭时间或更换封闭液）、抗体浓度过高（稀释一抗/二抗）、洗膜不彻底（增加TBST洗涤次数）。
条带模糊/拖尾：蛋白上样量过大（减少上样体积）、凝胶聚合不均（重新制胶）。
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