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ScFv/Fab抗体制备

服务编号:BIOFW088

服务简介

单链抗体(ScFv)是由一段弹性连接肽把抗体可变区重链(VH)与轻链(VL)相连而成,是具有亲代抗体全部抗原结合特异性的小功能结构单位,以分子量小(仅为完整抗体的1/6)、穿透力强、体内半衰期短、免疫源性低、可在原核细胞系统表达以及易于进行基因工程操作等特点而备受关注,近年来已在生物学、医学领域、实验室研究及疾病的诊治方面取得了长足的进展。Fab段是指抗原结合片段,相当于抗体分子的两个臂,由一个完整的轻链和重链的VHCH1结构域组成。单链抗体常常又存在亲和力低、功能单一、稳定性较差、体内清除过快等不足。通常FabScFv片段具有半衰期短和亲和力差的特征,然而在体内与体外的应用中,抗体分子的多价性至关重要。能够结合两个或多个结合位点不仅能有效的增加抗体分子的功能亲和力,而且还能使具有双特异的抗体的构建成为可能。

ScFv/Fab抗体为重组抗体,也称为基因工程抗体,是指通过DNA重组技术将抗体相应的基因序列根据需要进行改造和重组,并构建在质粒上,再通过蛋白外源表达技术将构建好的质粒转染/转化入适合的宿主细胞表达获得的抗体。重组抗体很好的解决了动物源抗体引起的人体排斥反应,使得抗体实现人源化,使抗体的效能更为完善。

百欧泰致力于基因、重组蛋白、抗体、噬菌体文库等生物制剂的研发,并致力于为客户提供一站式的CRO技术服务

 

服务步骤

基因密码子合成及密码子优化

载体构建

表达载体构建

测序验证

质粒生产

3  表达及纯化

细胞转染

纯化抗体

4 QC分析

5 交付(可商榷)

纯化抗体

质量检测报告

 

常用方法

单链抗体的制备:

scFv可在多个表达系统中进行表达,目前比较常用的,是大肠杆菌表达系统和哺乳动物表达系统。另外可以使用噬菌体展示技术生产得到scFv片段,通过免疫动物得到杂交瘤细胞,从中提取CDNA,利用逆转录PCR得到全套抗体的重链可变区VH和轻链可变区VL,利用重叠PCR将VH和VL片段扩增得到可变区基因片段,然后将基因克隆到噬菌体载体中了,电转感受态大肠杆菌,辅助噬菌体超染,得到的上清液即为单链抗体库,以抗原为固相,经过3-5轮吸附-洗脱-扩增筛选,即可得到单链抗体。

Fab片段的制备:

目前有酶解法、利用表达系统制备以及利用噬菌体展示技术进行抗体库筛选等方法进行Fab片段的制备。

酶解法:通常用木瓜蛋白酶或昌蛋白酶等对免疫球蛋白G进行降解,得到Fab,Fc片段等产物;利用表达系统生产Fab片段:通常利用大肠杆菌表达系统与哺乳动物动物表达系统;大肠杆菌表达系统具有生产成本低,生产速度快等优点,但是容易形成包涵体,复性后活性难以保证活性;用哺乳动物表达,可以顺利形成二硫键;更接近天然Fab结构,活性也更好;噬菌体展示技术:制备Fab片段抗体库,可经过熟轮的筛选富集,即可得到高亲和性的抗体。

服务优势

百欧泰团队具有丰富的抗体制备经验,可提供多种服务优势:

保证极高的成功率与快速交付速度

服务为主:价格合理,可根据客户需求综合分析,为客户提供满意的结果

专业的技术支持,保障强力、周到及时的售前售后服务支持,随时为您解答出现的任何问题

完整的上下游服务:提供从抗体制备、抗体测序,抗体标记修饰一站式技术服务,节约客户宝贵时间和经费

冻融稳定性高、体内半衰期2-3 weeks、有效控制免疫原性风险

独特灵活分子性实现双靶点作用的精细调节,达到更佳药效

 

 

服务流程

双方沟通一致后确定实验方案,确定服务要求-签订合同—预付款-开始实验-成果交付

 

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